Diabetologia：激活但功能受损的失忆Tregs在1型糖尿病患者进展缓慢的过程中逐渐扩展

从第一次经常显现出现家兔胃溃疡到经常显现出现1型式乳癌诊疗征状的方面数万人在婴幼儿时期就有不太好的描绘显现出，多个家兔胃溃疡感染性的婴幼儿当中有70%在血清转换后10年内患病乳癌，而随访15年的婴幼儿这一比例上升到84%。远比之下，占诊疗1型式乳癌一半以上的型式1型式乳癌的中风机制还没有得到更必要性的深入研究。

越来越多的人开始适用再行系统来表述1型式乳癌的方面：个体在经常显现出现多种家兔胃溃疡时进到第1阶段性，经常显现出现血糖所致时进到第2阶段性，经常显现出现征状时进到第3阶段性。一些多发家兔胃溃疡感染性的个体，在1期和2期，方面较迟，并发展为中风的1型式乳癌。我们先前描绘显现出了一第三组在首次探测到多种家兔胃溃疡比对后至更少10年无乳癌的极迟方面者，这第三组病人人数更少，但构造非常说明。随后，我们发现家兔自身免疫特异性CD8+T蛋白化学反应在方面加速的病人当中基本不假定，但在近期中风和长期假定的乳癌病人当中很容易探测到。这显然表明，与方面病人远比，这些病人胃溃疡化学反应的可调提升。

早期深入研究表明，尽管可调性T蛋白(Treg)需求量正常，但乳癌病人假定一些动态不足之处，其当中仅限于对IL-2的化学反应控制能力降低。此外，乳癌病人当中的effectCD4+T蛋白显然对可调更具抵抗性，乏善可陈为effectT蛋白的抑制作用消退，自然现象产生的Treg和体外产生的诱导Treg，以及免疫经历的CD4+T蛋白当中IL-2化学反应消退。本深入研究的目的是描绘显现出了CD4+可调性T蛋白(Treg)在一小群极加速方面者当中的构造，他们的总数为43岁(31-72岁)，随访时长为18-32年。

法则：BOX深入研究是一项以群体为基础的侧向深入研究，在21岁一般而言确诊的病人血亲当中健康检查1型式乳癌的危险因素。我们先前描绘显现出了长期加速方面者的构造，他们保持稳定多重家兔胃溃疡感染性超过10年，但没有经常显现出现乳癌的诊疗征状，迟性或非性功能胃溃疡。随后，10名继续保持稳定无乳癌并愿意提供大量血液比对的加速方面者纳入T和B蛋白动态比对。在目前的深入研究当中，8名迟方面者(SP第三组)，当中位年龄43岁(31-72岁)，18 - 32岁中间的家兔胃溃疡感染性。所有的大多数人都所处1型式乳癌方面的1期，尽管一些人随后失去了家兔胃溃疡对某些免疫的感染性化学反应，然而，一名病人已经所处2期至更少6年，但没有经常显现出现诊疗征状，一名病人被诊断为乳癌，该受试者72岁，在采集物理比对时，其HbA1c升高到53 mmol/mol(7%)，在数据比对当中对该诱导进行时了单独检验。剥离外周血单个氘蛋白(PBMCs)，有别于多实例流式蛋白拳法和T蛋白抑制作用试制检验诱导当中Treg的频数万人、基因型式和动态。适用FlowSOM和CITRUS(聚类鉴定、表征和回归)进行时无全权负责聚类比对，检验Treg基因型式。

结果：与身心健康诱导远比，来自迟方面体的清醒CD4+T蛋白的全权负责聚类揭示，激活的清醒CD4+ Treg频数万人上升，与糖皮质激素诱导的TNFR系统性蛋白(GITR)理解上升有关。一名HbA1c升高的病人与方面加速者和冗余的相异第三组远比，Treg谱有所不尽相同。动态比对表明，与身心健康诱导远比，来自加速方面体的Treg依赖性的CD4+effectT蛋白抑制作用轻微受损。乏善可陈为对effectCD4+T蛋白CD25和CD134理解的抑制作用上升。

上图1 深入的基因型式比对揭示，CD4+Treg亚型式在迟方面队列当中上升。由FlowSOM分解的Treg室，聚集在来自所有诱导的活CD4+CD45RA -蛋白上。根据记号物理解鉴定显现出10个元簇:清醒T蛋白_1;清醒T cell_2;清醒T cell_3;清醒T cell_4;CD49b清醒T蛋白;HLA-DR + GITR +清醒T蛋白;缓存Treg_1;缓存Treg_2;缓存Treg_3;和缓存Treg_4。(a)适用9个不尽相同Treg记号分解的10个元簇的MST。每个路由表代表一个空降兵(100个空降兵)，更大的元空降兵(10个元空降兵)在路由表第三组周围剪裁。每个路由表当中的点心上图暗示单个记号的理解级别。(b)每个元聚类的热上图，以揭示既有记号理解。(c, d)为HD第三组(c)和SP第三组(d)分解上图，以及FlowSOM识别的每个元簇的覆盖层。(e-l)一般来说丰度为每个metacluster装入支线上图(丰度> 0.05%)明确为HD和SP第三组:缓存Treg_2 (e),缓存Treg_3 (f),缓存Treg_4 (g), HLA-DR + GITR +清醒T蛋白(h)、清醒T cell_1(i),清醒T cell_2 (j),清醒T cell_3 (k) n d CD49b清醒T蛋白(l)。深金色边框代表慈善机构SP 606。**p< 0.01, Wilcoxon分组符号秩检验。此键适用于上图形部分(a)， (c)， (d)和d (e-l)

上图2 适用CITRUS的预测模型式证实，Treg频数万人的上升是方面加速的标志。分级门控(a - f)和柑橘比对(g-k)比较SP大多数人和冗余的HD大多数人在CD4+CD45RA−T蛋白上的差异。(a)亲本CD25+ cd127 lotreg和CD25loCD127+T c e l个体的别具特色上图。CD25+ cd127lotreg被CD39和FOXP3富集，然后通过HLA-DR和GITR理解进行时剥离，模拟FlowSOM个体。(b) HD(环纹)和SP(星点)第三组以及诱导SP 606(深金色)当中CD25+ cd127的频数万人简介上图。(c-f) CD25+CD127loCD39+FOXP3+和CD25loCD127+门控闭包的装入支线上图;(c) HLA-DRloGITR−(缓存Treg_2)， (d) HLA-DRintGITRlo(缓存Treg_3)， (e) HLA- d RhiGITR+(缓存Treg_4)， (f) HLA- d RhiGITR+(HLA-DR+GITR+缓存T cell)。(g - i)柑桔簇螺旋由(g) CD127， (h) CD25和(i) FOXP3理解强度剪裁，上标突显现出的簇被识别为SP和HD队列中间的不尽相同。(j)装入支线上图揭示了在SP(星点)和HD(灰点)第三组当中，CITRUS清醒Treg_3和Treg_4的一般来说丰度(比例)。(k)直方上图揭示每个簇的基因型式(蓝色)和Treg记号一般来说理解与或多或少理解(金色);上列，缓存Treg_3;示例几天后，缓存Treg_4。或多或少与所有其他簇当中记号的理解有关。*p< 0.05， **p< 0.01, Wilcoxon分组符号秩检验

上图3 与身心健康献血者远比，方面加速者清醒treg的GITR上升。每个清醒CD4+T蛋白元簇(清醒T蛋白_1;清醒T cell_2;清醒T cell_3;CD49b +清醒T蛋白;HLA-DR + GITR +清醒T蛋白;缓存Treg_2;缓存Treg_3;来自FlowSOM的memory Treg_4)探测每个理解记号的变化。(a,b)来自HD (a)和S (b)队列的理解热上图(sp606不仅限于在内)。(c,d)清醒Treg_4元簇当中所有HD(黄色)、所有SP(金色)和SP 606(深金色)的FlowSOM GITR理解串联，揭示直方上图(c)和简介上图(d)。Wilcoxon分组符号秩和检验，p< 0.07(深金色)所有诱导仅限于，p< 0.05(金色)诱导SP 606和冗余的HD不仅限于在测试当中。(e,f) HLA-DRhiGITR+Tregs当中GITR理解，从分级门控，从所有HD(黄色)、所有SP(金色)和SP 606(深金色)串联，揭示直方上图(e)和简介上图(f) *p< 0.05, Wilcoxon分组符号秩检验

上图4 来自加速方面的CD4+ treg蛋白支配effectCD4+T蛋白的控制能力降低。SP第三组用金色的支线和边框暗示，HD第三组用白色的支线和边框暗示，深金色的支线/边框暗示诱导sp606。适用CD4+CD25+ Treg分选试剂盒对CD4+T蛋白进行时分选。CD4+CD25−(；也者)被记号为CFSE, Treg按捕捉到的比例滴定。用抗CD3 /28微珠再生蛋白，养成3翌日进行时流式蛋白拳法探测。(a-d)与CD4+；也者一般来说应的treg养成(自体)(e-h) HD、SP或SP 606 Treg与HD；也者养成。(a,b,f) CFSE增殖(a,e)和CFSE抑制作用多于(b,f)。(c, d,h) CD25 (c,g)和CD134 (d,h)的抑制作用多于。适用感染性相异(激活的组织起来蛋白不含treg)计算抑制作用多于。*p< 0.05， **p< 0.01， ***p< 0.001，重复测量双向方差比对。†p < 0.0 5 Bonferroni的事后多重比较测试

上图5 effectCD4+T蛋白对加速方面的T蛋白再生的抑制作用更敏感。SP第三组用金色的支线和边框暗示，HD第三组用白色的支线和边框暗示，深金色的支线/边框暗示诱导sp606。适用CD4+CD25+Treg分选试剂盒对CD4+T蛋白进行时分选。CD4+CD25−(；也者)被cfsel记号，treg按捕捉到的比例滴定。用抗CD3 /28微珠再生蛋白，养成3翌日进行时流式蛋白拳法(CD25反染)和蛋白因子比对。HD Treg与HD、SP或sp606；也者共同养成。(a,b) CFSE增殖(a)和CFSE抑制作用百分数万人(b)。(c,d) CD25抑制作用百分数万人(c)和CD134抑制作用百分数万人(d)。(e,f) IFN-γ(e)和IL-17A (f)在共养成当中的理解。***p< 0.001， **p< 0.01，重复测量双向方差比对。†p < 0.0 5 Bonferroni的事后多重比较测试

结论：我们给显现出的结论是，来自加速方面子的再生清醒CD4+Treg在GITR理解当中得到了扩充和丰沛，重申了必要性深入研究Treg在1型式乳癌风险个体当中的异质性的必要性。

出处显现出处：

Boldison J, Long AE, Aitken RJ,et al.Activated but functionally impaired memory Tregs are expanded in slow progressors to type 1 diabetes.Diabetologia 2021 Oct 28